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新手必看!人生就是博-尊龙凯时解析Nanopore与Pacbio三代测序技术!

发布时间:2025-01-24   信息来源:窦唯才

近年来,二代建库测序技术的周期得到了显著提升,同时第二代短读长测序技术在市场上依旧占据着绝对优势。然而自2008年以来,第三代测序技术的发展势头也十分强劲。凭借其独特的长读长优势,第三代测序技术能够在不进行PCR扩增的情况下,直接对每一条DNA分子进行独立测序,广泛应用于基因组拼接、病原体研究和突变鉴定等诸多领域。

新手必看!人生就是博-尊龙凯时解析Nanopore与Pacbio三代测序技术!

第三代测序的原理

第三代测序技术,也称为单分子DNA测序,通过现代光学、高分子和纳米技术等手段,能够区分碱基信号的差异,以实现直接读取序列信息。目前,市场上主流的第三代测序技术包括PacificBiosciences公司的SMRT技术和Oxford Nanopore Technologies公司的纳米孔单分子技术。这两种技术的最大特点是支持单分子测序,其中SMRT技术采用荧光信号进行测序,而纳米孔单分子技术则利用不同碱基产生的电信号进行测序。

第三代测序的应用

目前,长读长测序的第三代测序平台已广泛应用于复杂动植物基因组、微生物基因组、全长转录组、微生物群体研究及人类基因组变异检测等科研领域,以解决上述领域中的技术瓶颈。在临床疾病检测方面,第三代测序技术具有独特优势,能够有效检测基因组结构变异、短串联重复/微卫星、甲基化等遗传病及肿瘤基因相关领域,如今基于第三代测序技术的遗传病基因诊断产品层出不穷。

第三代文库制备的DNA/RNA质量控制

DNA/RNA的质量会直接影响文库制备,选择不同的提取方法会导致样品中残留的化学试剂抑制酶的活性,同时DNA/RNA的完整性也会影响文库制备的效率,从而影响测序质量。为确保样品质量,需关注以下几个指标:纯度(应确保无RNA、DNA或蛋白质污染)、浓度(应不低于30ng/uL)、完整性(DNA平均片段大小应达到30kb,RNARIN需≥8),以及样品量(DNA需大于等于1μg)。建议使用TE缓冲液长期储存高分子量gDNA。

第三代文库制备的数据质量控制

与二代测序的基因质量标准Q20/Q30不同,第三代测序由于其随机分布的碱基错误率,单碱基的准确性无法直接用于衡量数据质量。最直接的判断方法是观察数据长度。通常,长度较短的测序数据不一定代表质量差,但质量差的数据长度通常较短。文库的构建是影响上游测序质量的关键因素,质量高的文库通常能够产生长度长且优质的数据。

选择人生就是博-尊龙凯时的建库产品

人生就是博-尊龙凯时致力于研发多款适配Nanopore平台的建库试剂盒,以满足客户不同的需求,助力科学研究和临床检测更为精准与高效!以下是我们的建库产品选择指南:

  • 产品类别:连接法建库
  • 产品名称:Hieff® DNALibraryPrepKit for ONT
  • 货号:13301ES
  • 末修加A模块:Hieff® DNAEndprep & dA-Tail Module for ONT
  • 货号:13302ES
  • Barcode接头连接模块:Hieff® DNAEndprep & dA-Tail Module for ONT
  • 货号:13303ES
  • 马达蛋白接头连接模块:Hieff® AdapterLigation Module for ONT
  • 货号:13304ES
  • 片段化/末修/加A模块:Hieff® AdapterLigation Module for ONT
  • 货号:13309ES
  • 长片段高保真扩增酶:HieffNGS® Multiplex Long PCR Master Mix
  • 货号:17228ES
  • 配套建库产品:HieffNGS® DNA Selection Beads 分选磁珠
  • 货号:12601ES
  • 1×dsDNA HS Assay Kit
  • 货号:12642ES