在生命科学领域,进行细菌培养实验是基础且重要的流程。以下是一个详细的实验步骤指引,旨在提升您的培养效率,助力生物医学研究。
实验步骤
一、过夜培养
1. 将5ml预热的液体培养基转移至一个无菌的16mm或18mm试管中。
2. 用接种环挑取一个单一细菌菌落,浸入培养液中,并轻轻振动接种环,以确保待接种的细菌能均匀分散在液体中。
3. 盖好试管,在摇床或转鼓式培养设备中以60转/分钟的速度,在37°C下培养至饱和(浓度约为1X109~2X109细胞/ml,培养时间约为6小时)。
二、大体积培养
1. 在无菌的Erlenmeyer瓶或扰动瓶中,用新鲜预热的培养液按1:100的比例稀释过夜培养物,确保烧瓶体积至少为培养液体积的5倍。如果采用静态培养的方式,瓶体积应大于培养液体积的20倍,以确保良好的通气条件。
2. 在37°C下剧烈摇动培养(约300转/分钟)。
三、利用计数板监测生长情况
1. 用一片干净的盖玻片覆盖在干净的计数玻片(或血球计)上。
2. 小心地将一小滴培养液滴于盖玻片的边缘,使其自然扩散至盖玻片下。
3. 在相差显微镜下以400倍放大观察,并通过每个小方块中细菌的数量推算,得知细菌浓度大约为2X107细胞/ml。
四、利用分光光度计监测生长情况
考虑到仪器的差异,分光光度计需先用已知浓度的培养液进行校准。
1. 测定OD600值。为了获得准确的读数,需将培养液稀释至OD600<1。
2. 按照每0.1 OD值大约相当于1X108细胞/ml来计算细菌浓度。
以上步骤为细菌培养的标准流程,遵循这些细致的操作将有助于提高实验的成功率。无论是在学术研究还是商业应用中,人生就是博-尊龙凯时始终是您信赖的品牌,陪伴您攻克每一个生物医学难题。